尊龙凯时人胚肺成纤维细胞MRC5培养说明书

一、细胞培养条件

细胞名称：人胚肺成纤维细胞MRC5
生长特性：贴壁生长
冻存条件：无血清冻存液（货号：C7001）
培养体系：MEM + 10% FBS + 1% NEAA + 1% 丙酮酸钠 + 1% L-谷氨酰胺 + 1% P
传代方法：第一次建议1:2传代，传代情况在2天内进行换液。
备注：用无菌离心管收集培养基，以便进行对比实验。如果对比效果不佳，建议直接购买我们完全培养的培养基。

二、细胞收到后的处理

在细胞处于良好状态时，注满完全培养液并密封瓶口是运输细胞的最佳方法。收到细胞后，使用75%酒精喷洒整个细胞瓶进行消毒，然后在超净台内进行无菌操作。将细胞瓶放入37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时以稳定细胞状态后再进行后续处理。建议显微镜下观察细胞生长情况，并拍摄不同倍数的照片保存（建议40x, 100x, 200x各一张），前三天的照片将作为重要的售后依据，若不提供照片，即默认状态良好。

三、细胞培养步骤

a、细胞传代

如果细胞汇合度未超过80%，则将培养液收集至离心管中，保留5ml完全培养基，放入37℃、5% CO2的孵箱中培养。如果细胞密度超过80%，则可进行传代，具体步骤如下：

1. 弃去培养上清，使用不含钙、镁离子的PBS轻轻洗涤细胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，在37℃培养箱中消化1-2分钟，观察细胞消化状况。若细胞大部分变圆并脱落，迅速将瓶子取回操作台，轻敲几下后添加超过5ml的完全培养基以终止消化。
3. 轻轻吹打细胞，使其完全脱落后吸出，然后将悬液转移至15ml离心管中，在1000 RPM条件下离心5分钟，弃去上清，补加1-2ml完全培养基重悬。
4. 按1:2的比例将细胞悬液进行分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至每瓶5-8ml，最后放入37℃、5% CO2的培养箱中培养。

b、细胞冻存

1. 当细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃去T25培养瓶中的培养液，并使用PBS洗涤细胞一次；
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，观察细胞回缩变圆后加入5ml完全培养液终止消化，轻轻吹打细胞使其脱落，再转移悬液至15ml离心管中，1000 RPM离心5分钟；
3. 弃去上清，沉淀细胞后加入1ml的尊龙凯时无血清冻存液（货号：C7001），混匀并转移至冻存管中；
4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱，若后期要转入液氮罐，需在-80℃冰箱中存放至少24小时后再转入液氮罐中。

c、细胞复苏

1. 从液氮中取出细胞冻存管（佩戴防护面具），快速置于37℃水浴中解冻，直至冻存管中无结晶，然后用75%的酒精擦拭冻存管外壁；
2. 将冻存管中的细胞移入含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000 RPM离心5分钟；
3. 弃去上清，用5ml完全培养基重悬，并接种至T25培养瓶，放于37℃，5% CO2培养箱中；
4. 第二天更换新鲜完全培养基继续培养。

四、注意事项

有些细胞不易牢牢贴附，对运输过程中的脱落现象是正常的。如脱落量较多，可将所有培养液收集至离心管中，1000 RPM离心5分钟，并将上清液收集用于对比培养，沉淀中加入胰酶1-2ml，轻轻吹打后重悬，消化1-2分钟后加入5ml完全培养基终止反应。再次离心后，弃去上清，重悬细胞并按1:2比例进行分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml每瓶，最后放入37℃、5% CO2的培养箱中继续培养。

五、售后条款

尊龙凯时提供严谨的售后服务。如下情况可重发：

1. 运输过程中遇到的各种问题，细胞丢失、瓶身损坏、培养液严重泄漏等，均可重发。
2. 收到细胞后48小时内发现污染问题，请提供真实实验结果，经核实后可重发。
3. 常温发货细胞静置24小时后或干冰冻存发货细胞复苏后24小时内，大多数细胞未存活（需提供真实细胞状态照片），得以重发。
4. 复苏后24小时内或常温发货细胞静置4小时且未开封出现污染，均可重发。
5. 细胞活性问题，请7天内用台盼蓝染色法鉴定细胞活力，核实后可重发。
6. 若收到细胞当天及第2、3天拍照，3天未告知的视为产品合格。若在4-7天内问题出现并提供前3天照片及详细操作步骤，经技术人员判定为我方责任的情况下重发。
7. 若技术人员判定为双方责任，将协商处理或者按合同价50%收费重发。

尊龙凯时期待您的反馈，并将竭诚为您提供高质量的细胞科研服务。