尊龙凯时细胞冻存试剂盒使用说明书（BA3309）

一、产品简介

本产品专为各种哺乳动物的原代细胞及传代细胞系设计，适用于细胞冻存和保种。复苏后能够有效保持细胞的存活率，并具备良好的储存稳定性与简便的操作流程。

产品组分：通用细胞冻存液 BA3309，100mL。

保存条件：-20℃ 避光保存，有效期为两年。

二、注意事项

1. 务必使用水平离心机，并设定合适的参数，以避免因操作不当影响实验结果。
2. 本产品为无菌产品，请务必穿实验服并佩戴一次性手套，注意无菌操作，以防止微生物污染。
3. 使用前请确保试剂完全融化并充分混匀。
4. 确保冻存前细胞状态良好。

三、自备材料

细胞冻存材料：

1. 仪器：水平离心机、细胞计数仪、-80℃冰箱。
2. 耗材：细胞冻存管、程序性冻存盒、低吸附枪头。

四、细胞复苏材料

材料：

1. 仪器：水平离心机、水浴锅。
2. 试剂：RPMI 1640 培养基。
3. 耗材：酒精棉球、低吸附枪头、离心管。

五、使用方法

细胞冻存

1. 在使用前，将通用细胞冻存液完全融化并混匀。
2. 使用细胞计数仪计算细胞总数，冻存密度一般为1x10⁶/mL。
3. 将细胞离心，弃去上清，保留细胞沉淀。不同细胞类型的离心条件略有不同，例如人PBMC细胞的离心条件为300xg，5分钟。
4. 根据细胞数量计算需要加入的细胞冻存液体积，用移液枪吸取细胞冻存液并轻轻重悬细胞。
5. 根据体积将细胞分装至细胞冻存管中，并进行标记。注意：务必使用专为液氮冻存设计的细胞冻存管，切勿使用普通离心管。
6. 将细胞冻存管放置在可逐步降低温度的装置中，如程序性冻存盒，再放入-80℃冰箱，确保温度下降速度约为1°/min。

细胞复苏

1. 打开恒温水浴锅，设置为37℃，取一离心管，加入5mL细胞培养基，于37℃水浴中温浴至培养基达到37℃，约2~5分钟。
2. 取出冻存管，立即放入水浴中快速摇晃，确保冻存液迅速融化。
3. 完全融化后，用酒精棉球擦洗冻存管外部，以降低污染风险。
4. 立即打开冻存管，将冻存液一滴一滴地加入预热的培养基中，一边滴加一边轻轻摇晃，完成后放入水平离心机，在4℃，300xg下离心5分钟。
5. 弃去上清，加入适当体积的培养基重悬细胞。

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