尊龙凯时提供的人急性淋巴母细胞白血病细胞MKN45培养手册详细说明了该细胞的培养条件和操作流程，旨在确保用户在研究中获得最佳结果。

一、细胞培养条件

细胞名称：人急性淋巴母细胞白血病细胞MKN45

生长特性：悬浮生长

冻存条件：使用无血清冻存液（货号：C7001）进行冻存

培养体系：采用1640培养基（含NAHCO3 15g/L）+ 10% FBS + 1% P

传代方法：建议第一次传代比例为1:2，通常每2天更换培养液。请注意，在对比培养时，如发生不良反应，建议直接采购尊龙凯时提供的完全培养基。

二、细胞收到后的处理

在细胞状态良好后，应灌满完全培养液并密封瓶口，这是运输细胞的最佳方法。首先，用75%酒精喷洒消毒整个细胞瓶，之后在超净台内操作，最后将细胞瓶放入37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时，以稳定细胞状态。显微镜观察细胞生长，并记录不同放大倍数的图像（建议40x、100x、200x各一张）。前三天的照片是重要的售后依据，未提供照片视为收到状态良好。建议在传代后，将一瓶细胞用原瓶的完全培养基，另一瓶用自配的完全培养基进行对比培养，并在换液后松开瓶盖。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

若细胞未超过80%汇合度，可将培养液收集至离心管，保留5ml完全培养基置于37℃、5% CO2孵箱培养；若细胞密度超过80%，则进行以下传代步骤：

1. 弃去培养上清，使用不含钙、镁的PBS清洗细胞1-2次。
2. 添加025%胰蛋白酶消化液约1-2ml，置于培养箱中消化1-2分钟后观察，若细胞大部分变圆脱落，迅速加入5ml完全培养基终止消化。
3. 轻轻吹打细胞以完全脱落，吸出后转移至15ml离心管中，1000RPM离心5分钟，弃去上清，补加1-2ml完全培养基重悬。
4. 按1:2比例分瓶传代，补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5% CO2细胞培养箱中培养。

b. 细胞冻存

1. 细胞长至覆盖培养瓶80%面积时，弃去培养液并用PBS清洗细胞一次。
2. 添加025%胰蛋白酶消化液约1ml，待细胞回缩变圆后加入5ml完全培养基终止消化，轻轻吹打后转移至离心管，1000rpm离心5分钟。
3. 弃上清后，加入1ml无血清冻存液（货号：C7001）混匀后转入冻存管。
4. 冻存细胞直接放入-80℃冰箱，若需转入液氮罐，至少在-80℃冰箱存放24小时后再转入。

c. 细胞复苏

1. 从液氮中取出细胞冻存管（请佩戴防护设备），快速置入37℃水浴中解冻，直至无结晶，然后用75%酒精擦拭冻存管表面。
2. 将冻存管中的细胞转移至含5ml完全培养基的离心管中，1000rpm离心5分钟。
3. 弃上清，使用5ml完全培养基重悬细胞，接种至T25培养瓶，放于37℃、5% CO2培养箱中。
4. 第二天更换为新鲜的完全培养基继续培养。

四、注意事项

在运输过程中，某些细胞可能会因贴壁不牢而脱落，这属于正常现象。如果细胞脱落严重，可以收集培养液至离心管中，1000rpm离心5分钟，收集上清进行过渡培养。随后，加入胰酶进行重悬处理，按照步骤进行分瓶传代，确保每瓶补充新的完全培养基，最后放置于37℃、5% CO2培养箱中。

五、售后条款

尊龙凯时承诺为客户提供优质的售后服务。若细胞出现问题，可予以重发的情况包括：

1. 运输途中细胞丢失、瓶身破损、培养液严重漏液等。
2. 细胞污染问题，如在收到产品48小时内提供真实实验结果。
3. 常温发货细胞24小时无存活，需提供真实清晰照片。
4. 细胞复苏后出现污染等其他问题，需经过核实。

请注意，不可重发的情况包括客户造成的污染、不正确的操作或使用非推荐的培养体系等。对于具体的售后问题，尊龙凯时将依据实际情况进行评估和处理。