### 大鼠原代脂肪间充质干细胞的提取方法

#### 实验材料准备

选择2周龄或体重约200克的SD大鼠作为实验对象。准备灭菌工具，包括镊子、眼科直剪、眼科弯剪、磁珠等。还需要5mL注射器、0.22μm滤器、泡沫板以及图钉用于固定大鼠。此外，75%乙醇用于表面消毒。将无菌PBS水预冷，并准备15mL和50mL的无菌离心管、细胞筛、无菌培养瓶等。培养基为SD大鼠脂肪间充质干细胞完全培养基。

#### 实验操作

将实验所需的所有材料放入超净工作台，并进行紫外线消毒30分钟。接下来，配制约5mL浓度为0.1%的Ⅰ型胶原酶，并进行过滤除菌。将大鼠进行颈部断头处死后，浸泡于75%酒精中2-3分钟，然后固定在泡沫板上，再在超净工作台进行后续操作。

小心剪开大鼠腹股沟区的皮肤，暴露脂肪组织。仔细剪取脂肪组织并放入PBS中，尽量避免损伤血管。使用PBS清洗脂肪组织，去除多余的血管和淋巴结。将脂肪组织剪碎至约2mm×2mm的适宜大小，加入胶原酶，置于37℃环境下进行消化，并每隔5分钟进行震荡或持续搅拌。

消化完成后，将细胞悬液转移至离心管中，进行离心，弃去上层的脂滴泡沫和上清液，然后用培养基重悬沉淀。过滤细胞悬液后，再次离心并弃去上清液，最终用培养基重悬细胞，并接种到培养瓶中。最后，将培养瓶置于37℃、含有5% CO2的培养箱中进行细胞培养。

#### 注意事项

在整个实验过程中，必须保持无菌操作，以防止细胞污染。脂肪组织的剪取和清洗过程需非常细致，以避免损伤细胞或引入杂质。消化过程中的时间和温度需严格控制，避免过度消化导致细胞损伤。此外，离心和过滤过程需轻柔操作，以防细胞流失或破裂。

在进行生物医疗相关实验时，选择优质的工具和试剂，如尊龙凯时品牌，能够提高实验的成功率，确保获得可靠的结果。