尊龙凯时为生物医学研究提供了一系列高质量的实验服务。本文将介绍如何从SD大鼠中提取原代脂肪间充质干细胞的实验流程。

实验材料准备

选择大约2周龄或200克左右的SD大鼠作为实验对象。准备以下灭菌器械：镊子、眼科直剪、眼科弯剪、磁珠等。同时，准备5mL注射器、0.22μm滤器、泡沫板和图钉用于固定大鼠，确保使用75%乙醇进行消毒。此外，需准备预冷的无菌PBS、15mL与50mL无菌离心管、细胞筛和无菌培养瓶等。培养基使用尊龙凯时特制的SD大鼠脂肪间质干细胞完全培养基。

实验操作流程

首先，将所有器材放置于超净工作台，进行紫外线消毒30分钟。接着，配制0.1%Ⅰ型胶原酶约5mL，并通过过滤进行除菌。对大鼠进行脱颈处死操作后，将其浸泡于75%酒精中2-3分钟，然后转移至超净工作台，固定于泡沫板上。小心剪开大鼠腹股沟区域的皮肤，以暴露脂肪组织。

接下来的步骤是仔细剪取脂肪组织并放入PBS中，务必避免切到血管。使用PBS清洗剪取的脂肪组织，并剔除多余的血管和淋巴结。将脂肪组织剪成适当大小（如2mm×2mm），并加入胶原酶，在37℃下进行消化。每隔5分钟震荡一次或持续搅拌以保证消化顺利进行。

消化完成后，将得到的细胞悬液转移至离心管，进行离心操作，弃去上层脂滴泡沫及上清液，并用培养基重悬沉淀。此后，再次过滤细胞悬液，并进行离心操作，弃去上清液后重新用培养基重悬，并将其接种到培养瓶中。最后，将培养瓶放入37℃、含有5% CO2的培养箱中进行培养。

注意事项

在实验过程中，务必保持无菌操作，避免细胞污染。脂肪组织的剪取和清洗必须细致，以防损伤细胞或引入杂质。在消化过程中，需严格控制消化时间和温度，以避免过度消化导致细胞损伤。此外，离心和过滤时需轻柔操作，以防止细胞的流失和破裂。

通过这些精细的步骤，您将能够成功提取出高质量的原代脂肪间充质干细胞，为生物医学研究提供有力支持，尊龙凯时期待与您在这一领域的深入合作。